BCA蛋白浓度检测试剂盒
货号：U10007A
规格：500T
储存：常温
价格：￥299元
·产品描述
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产品编号
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产品名称 |
产品规格 |
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U10007A
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BCA蛋白浓度检测试剂盒 | 500次 |
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+ ，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562nm 处的吸光值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。
该增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于试管法检测，也可用于微孔板法检测。试管法需较大量的蛋白样品（100μl）和工作液（2mL），蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），蛋白质测定范围为20-2000μg/ml，采用加强法可以检测到5μg/ml；微孔板法操作简单方便，仅需少量（10-25μl）的蛋白样品和工作液（200μl），蛋白样品与工作液的比率为1:8（v/v）或者1:20（v/v），蛋白质测定范围为20-2000μg/ml，采用加强法可以检测到5μg/ml。我公司提供两种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次。酶标法分别可做500次，2500次。
·产品组成
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产品编号
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产品名称 |
包装 |
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U10007A -1
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BCA 试剂 A
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100ml
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U10007A -2 |
BCA 试剂 B |
5ml |
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U10007A -3 |
BSA 标准品 2mg/ml
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2ml |
·保存方法
室温保存，一年有效。
·产品优势
1.准确灵敏：增强型BCA试剂的蛋白质测定范围为10-2000μg/ml，微孔板法试剂最低检测范围可达5-250μg/ml。
2.快速：比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短，30分钟即可完成检测，比传统的Lowry法检测速度快4倍而且更加方便。
3.经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。
4.检测不同蛋白质分子的变异系数远远小于考马斯亮蓝。
5.可兼容样品中去污剂以及大部分化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5 % 的 T r i t o n X - 1 0 0 ，5 %的Tween-20，60，80。（详情见附录）
·使用说明
配置标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
注：BSA标准品浓度为2mg/ml，稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用水或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制表一。
表一BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000 μg/ml）
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Vial
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稀释液体积(μl) |
BSA溶液体积(μl) |
BSA终浓度(μg/ml) |
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A
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0 | BSA标准液 100 |
2000 |
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B
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25 |
BSA标准液 75 |
1500 |
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C
|
65 |
BSA标准液 65 |
1000 |
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D
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35 |
Vial B 35 |
750 |
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E
|
65 |
Vial C 65 |
500 |
|
F |
65 |
Vial E 65 |
250 |
|
G
|
65 |
Vial F 65 |
125 |
|
H
|
80 |
Vial G 20 |
25 |
|
I
|
80 |
0 |
0=Blank |
表二BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围5-250μg /ml）
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Vial
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稀释液体积(μl) |
BSA溶液体积(μl) |
BSA终浓度(μg/ml) |
| A |
70
|
BSA标准液 10 |
250 |
|
B
|
40 |
Vial A 40 |
125 |
|
C
|
45 |
Vial B 30 |
50
|
| D |
40
|
Vial C 40 |
25 |
|
E
|
40 |
Vial D 10 |
5 |
|
F
|
40 |
0 | 0 |
2. 配制BCA工作液
1)计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
注：试管法检测时每个样品加2.0ml BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。
2)配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1） ，充分混匀。
注： BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。
二、检测方法
1. 试管检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1)各取100 μl标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入2.0 ml BCA工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。
标准孵育方法：37℃孵育30 min或者室温2h （检测范围：20-2000 μg/ml）
增强孵育方法：60℃孵育30 min（检测范围：5-250 μg/ml）
注：BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562 nm，在10分钟内对所有样品读数。
注：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是
10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-
最终的OD562 nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1)各取25 μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
注：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μl标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000 μg/ml。
2)每孔加入200 μl BCA工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30 min。
3)冷却到室温，在酶标仪上的562 nm波长范围处检测吸光度。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562 nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
