RIPA裂解液-强
货号：U10001
规格：100mL
储存：2~8℃
价格：￥199元
·产品描述
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产品编号
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产品名称 |
产品规格 |
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U10001
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RIPA 裂解液（强） | 100 mL |
UUBIOTM RIPA裂解液是一种传统的细胞及组织裂解液。可快速的从细胞或组织中提取蛋白并用于常规的Western、IP、ELISA等实验。RIPA裂解液根据其裂解强度可分为弱，中，强三种。UUBIOTM RIPA裂解液（强）成分明确，主要成分为：25 mM Tris (pH 7.6)、150 mm Nacl、1% NP-40、 1% sodium deoxycholate、0.1% SDS等。
·保存方法
4-8℃保存，一年有效。
贴壁细胞
1.取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂cocktail及PMSF (终浓度1mM)。
2.去除细胞培养液，用预冷的 PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200ul的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300ul。
注：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
3.用移液枪吹打数下，冰上放置10min，期间每隔2分钟用枪吹打数下。
4.转移细胞裂解液于1.5 ml EP管中。
5.12,000 g，4℃离心5min。
6.收集上清。
悬浮细胞
1.取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂cocktail及PMSF (终浓度1mM)。
2.收集细胞0.5~2x107于1.5ml离心管中，1ml预冷的PBS洗涤两次，1,000xg离心3分钟，弃上清，重复三次。
3.按照6孔板每孔加入150-200ul的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300ul。
注：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
4.用移液枪吹打数下并剧烈震荡，冰上放置10min，期间每隔2分钟震荡一次。
5.12,000 g，4℃离心5min。
6.收集上清。
1.把组织剪成细小的碎片。
2.取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂cocktail及PMSF (终浓度1mM)。
3.按照每100mg组织加入1ml裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可适当增加裂解液，如果需要增加蛋白浓度可适当减少使用的裂解液体积）。
4.用匀浆器匀浆，直至充分裂解（为防止蛋白降解请于冰上操作）。
5.12,000 g，4℃离心5min。
6.收集上清。
·注意事项
1.本产品不含蛋白酶抑制剂，使用前请加入蛋白酶抑制剂cocktail及PMSF。
2.如需检测磷酸化蛋白需加入磷酸酶抑制剂。
3.蛋白样品提取后应及时分装，避免反复冻融。
